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上皮細胞的培養(yǎng)方法
日期：2026-01-21 00:48
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摘要：
上皮細胞的培養(yǎng)方法
上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養(yǎng)特別受到重視.但上皮細胞培養(yǎng)中常混雜有成纖維細胞,培養(yǎng)時生長速度往往超過上皮細胞,并難以純化,同時上皮細胞難以在體外長期生存,因此純化和延長生存時間是培養(yǎng)關鍵.
體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時,細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象.降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長因子,均有利于表皮細胞生長.
以表皮細胞為例,用皮膚表皮和真皮分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細胞,其法如下（黑木凳志夫 1981）
1、取材：外科植皮或手術殘余皮膚小塊,早產流產兒皮膚更好,取角化層薄者,切成0.5－1平方厘米小塊.
2、置0.02%EDTA中,室溫,5分鐘.
3、換入0.25%胰蛋白酶中,4℃過夜.
4、分離：取出皮塊,用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開.
5、取出表皮,剪成更小的塊后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分鐘.
6、反復吹打,制成懸液.
7、培養(yǎng)：用80目不銹鋼紗網濾過后,低速離心,吸去上清.
8、直接加入培養(yǎng)基（Eagle加20%小牛血清）制成細胞懸液,接種入培養(yǎng)瓶,CO2溫箱培養(yǎng).
體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時,細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象.降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長因子,均有利于表皮細胞生長.
以表皮細胞為例,用皮膚表皮和真皮分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細胞,其法如下（黑木凳志夫 1981）
1、取材：外科植皮或手術殘余皮膚小塊,早產流產兒皮膚更好,取角化層薄者,切成0.5－1平方厘米小塊.
2、置0.02%EDTA中,室溫,5分鐘.
3、換入0.25%胰蛋白酶中,4℃過夜.
4、分離：取出皮塊,用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開.
5、取出表皮,剪成更小的塊后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分鐘.
6、反復吹打,制成懸液.
7、培養(yǎng)：用80目不銹鋼紗網濾過后,低速離心,吸去上清.
8、直接加入培養(yǎng)基（Eagle加20%小牛血清）制成細胞懸液,接種入培養(yǎng)瓶,CO2溫箱培養(yǎng).
