細(xì)胞污染的類型

是不是細(xì)胞污染？是哪種細(xì)胞污染？如何識(shí)別？

細(xì)胞中如果污染**，*常見的有枯草桿菌等革蘭陽性菌以及大腸桿菌、假單孢菌等革蘭陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。培養(yǎng)細(xì)胞受**污染后，會(huì)很快出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH 改變。

也有少數(shù)培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以，每天應(yīng)仔細(xì)觀察。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，*后變圓脫落死亡，造成實(shí)驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

**在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染**的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。

如何預(yù)防

• 仔細(xì)檢查一下器皿的**情況，是否在高壓**時(shí)放氣時(shí)間足夠、壓力足夠。

• 重點(diǎn)檢查和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意。

• 下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象，可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的***處理。

霉菌污染以后，培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37 度孵箱培養(yǎng) 2-3 天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)。鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差。

用硫酸銅溶液擦拭 CO2 孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體, 可以防止霉菌污染。

CO2 孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2 月左右），尤其在多雨的季節(jié)。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用 84 液擦洗－清水擦洗－75% 酒精擦洗－紫外燈照。

如何預(yù)防

• 可在培養(yǎng)基里加 3u/mL 的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗。

• 細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。

• 將環(huán)境徹底**，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

上圖是典型的霉菌污染，肉眼看到白色的團(tuán)塊或白點(diǎn)，鏡下呈絲狀。400 倍圖片如上。

支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁。

國(guó)內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中*常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。可用泰樂菌素——獸用支原體病的藥，無任何**反應(yīng)。如果用的是 Sigma 公司的，使用時(shí)用 50u g/mL Tylosin 培養(yǎng)液培養(yǎng) 6 天或連續(xù)傳兩代即可**支原體污染。如果作為常用的***的話, 建議用 8 ug/mL

一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些**開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。

**生長(zhǎng)的比較慢，不象**那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。

培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，*終形成惡性循環(huán)。

污染的可能原因：配液**問題、操作問題、環(huán)境問題等等。

關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37 度試培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察。如果沒有**生長(zhǎng) 就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測(cè)細(xì)胞某項(xiàng)指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

如何預(yù)防

• 孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)**或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱，同時(shí)孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水。

• 超凈臺(tái)、取材、器材、培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶、操作等因素

• 超凈臺(tái)的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到 6-8 格。否則也可能能致霉菌污染。

• 無菌室經(jīng)甲醛熏蒸**后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。